| 品牌: 美国 neweast biosciences |
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| 货号: 82501 |
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| 规格: 30 assays |
| 产品全名: rab7 pull-down activation assay kit |
| 应用: pull-down |
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| 监测: active rab7-gtp level |
rab7 pull-down activation assay kit
cat. # 82501
introduction
a. background
小的gtpase是一个超级家族的细胞信号调节器。小的ras样gtpase rab7是一种进化保守蛋白，最初因其能够恢复ras转化成纤维细胞的形态表型而引起人们的兴趣。rab7受大量刺激调控，包括生长因子和细胞因子，也包括物理力和渗透胁迫。rab7被证明可以调节多种基本细胞过程。rab7在内皮细胞中的功能研究最多的方面涉及其在细胞-细胞连接形成和重塑中的调节作用。
rab7活化检测试剂盒基于结构特异性单克隆抗体，特异性识别rab7- gtp，但不识别rab7- gdp。由于单克隆抗体对其抗原的高亲和力，可以在短时间内进行活化试验。该方法提供了可靠的结果和一致的重复性。
该抗rab7- gtp单克隆抗体还可用于监测rab7在细胞和组织中的活化。
b. assay principle
rab7激活检测试剂盒使用结构特异性抗rab7- gtp小鼠单克隆抗体来测量细胞提取物或体外gtpγs负载rab7激活试验中的rab7- gtp水平。抗rab7-gtp小鼠单克隆抗体首先与含有rab7-gtp的细胞裂解液孵育。接下来，gtp结合的rab7被蛋白a/g琼脂糖拉下。最后，采用抗rab7兔多克隆抗体(anti-rab7 rabbit polyclonal antibody)进行免疫印迹检测沉淀的rab7-gtp。
c. kit components
1. anti-rab7-gtp mouse monoclonal antibody (cat. # 26923): one vial – 35 μl (1 mg/ml) in pbs, ph 7.4, containing 50% glycerol. this antibody specifically recognizes rab7-gtp from all vertebrates.
2. protein a/g agarose (cat. # 30301): one vial – 600 μl of 50% slurry.
3. 5x assay/lysis buffer (cat. # 30302): one bottle – 30 ml of 250 mm tris-hcl, ph 8, 750 mm nacl, 50 mm mgcl2, 5 mm edta, 5% triton x-100.
4. anti-rab7 rabbit polyclonal antibody (cat. # 21069): one vial – 50 μl (1 mg/ml) in pbs, ph 7.4, contained 50% glycerol.
5. 100x gtpγs (cat. # 30303): one vial – 50 μl at 10 mm, use 5 μl of gtpγs for gtp-labeling of 0.5 ml of cell lysate.
6. 100x gdp (cat. # 30304): one vial – 50 μl at 100 mm, use 5 μl of gdp for gdp-labeling of 0.5 ml of cell lysate.
7. hrp-goat anti-rabbit igg (cat. #29002): 50 μl (0.4 mg/ml) in pbs, ph 7.4, contained 50% glycerol.
d. materials needed but not supplied
1. stimulated and non-stimulated cell lysates
2. protease inhibitors
3. 4 °c tube rocker or shaker
4. 0.5 m edta at ph 8.0
5. 1.0 m mgcl2
6. 2x reducing sds-page sample buffer
7. electrophoresis and immunoblotting systems
8. immunoblotting wash buffer such as tbst (10 mm tris-hcl, ph 7.4, 0.15 m nacl, 0.05% tween-20)
9. immunoblotting blocking buffer (tbst containing 5% non-fat dry milk or 3% bsa)
10. ecl detection reagents
e. example results
下图展示了rab7激活检测试剂盒的示例结果。仅供参考。
rab7激活试验。纯化的gst标记rab7蛋白(cat。#10134)用抗rab7 - gtp单克隆抗体(cat。第26923号)经gdp(通道1)或gtpγs(通道2)处理后，用抗rab7多克隆抗体(cat。# 21069)。输入控件显示在底部面板中。
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