quantseq kit 是一个文库制备试剂盒,由它构建的文库可以用于illumina和总rna的起始量低至100 pg(对于illumina平台)和5ng( 对于ion torrent平台)。quantseq适用于反复构建低质量的rna文库,包括ffpe样品。
rapid turnaround
简单的工作流程可以将文库制备时间控制在4.5小时以内,而这已经包括了手工操作时间。除去手工操作时间,工作流程不超过2小时。
高度链特异性
quantseq保持了链特异性>99.9%,并且可以map到基因组上相应的序列上,从而发现和定量反义转录本和融合基因。
mapping of tes
quantseq可以准确查找到rna3'端的poly(a) ,因此可以得到关于3'utr的精确信息。
perfect for gene counting
每个转录本只产生一个片段;因此没有必要做长度的均一化。这样可以更精确地确定基因的表达量,并且在基因表达和eqtl研究中quantseq成为芯片和常规rna-seq的最佳替代品。
cost saving multiplexing
quantseq文库用于多重文库的构建。对于 illumina 的quantseq3' mrna-seq 文库制备试剂盒中的barcodes允许在 illumina flow cell每条通道上测序的样本多达96个。对于ion torrent的quantseq3' mrna-seq文库制备试剂盒中的barcodes允许在ion torrent仪器上多达48个样本一起进行测序。如此高的混样程度可以节约成本如同quantseq特定长度节省测序空间一样。quantseq所设计生产的插入片段大小适用于短测序服务(sr50,sr100)。
有关barcodes和说明如何使用它们的详细信息,请参考附录d:混样,quantseq for ion torrent用户指南(第23页)和附录e:multiplexing, quantseq for illumina user guide(第25页)。
简单的生物信息学分析
序列匹配是简单的,它通过跳过交叉点检来实现。测序操作是在转录本的最3'端几乎没有结点的位置产生。数据处理也可以加速使用,例如bowtie2代替tophat2。
ion torrent平台,文库所测的序列靠近poly(a)rna的3'端。
该盒子有两种版本。第×个版本的ngs测定的序列是靠近 poly(a) 尾生成,直接反映了mrna序列。同时提供了illumina和 ion torrent 两个平台的版本。quantseq reverse(rev)仅适用于illumina平台。使用这个盒子,在ngs从poly(a)尾开始读取read 1时可以精确的查找到3'端(3'utr)。然而,为了实现多个文库同时测序,测序引物需要被custom sequencing primer(csp,包括在试剂盒内)所替换。读取的read 1可以反映cdna序列。