猪布氏杆菌pcr检测试剂盒反应五要素:
参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2
引物:引物是pcr特异性反应的关键,pcr 产物的特异性取决于引物与模板dna互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板dna序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:g c含量以40-60%为宜,g c太少扩增效果不佳,g c过多易出现非特异条带。atgc*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。